X33酵母感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1、取需轉(zhuǎn)化質(zhì)粒5µg，酶切，回收；

2、取一支無(wú)菌的1.5ml EP管，依次加入預(yù)冷的線(xiàn)性質(zhì)粒1-5µg（體積不高于15µl），酵母促轉(zhuǎn)化劑10µl，100µl冰上融化的感受態(tài)細(xì)胞，畢赤酵母轉(zhuǎn)化液500µl，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3、30℃水浴30min，每15min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

4、每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，也可不做）

5、42℃水浴15min，每7.5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

6、12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，每支加1ml的YPGPlus（或YPG）于30℃復(fù)蘇1h；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，也可不做）

7、12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)3-7d。

X33酵母感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1、使用酵母促轉(zhuǎn)化劑前，請(qǐng)把裝有酵母促轉(zhuǎn)化劑的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2、轉(zhuǎn)化液低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫下溶解后使用。

3、轉(zhuǎn)化全程要無(wú)菌操作。